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假病毒凍干簡介

更新時間:2022-08-23 點擊次數:2612

假病毒是指一種反轉錄病毒整合了另外一種病毒的囊膜糖蛋白,從而形成的具有外源性病毒囊膜,而基因組仍保持著反轉錄病毒本身基因組特性的病毒。假病毒用帶有一種病毒外膜蛋白基因的質粒與帶有另一種病毒骨架基因的質粒共轉染到包裝細胞(如293T細胞)中,外膜蛋白基因在包裝細胞表面表達出外膜蛋白,另一種病毒的基因在包裝細胞中轉錄翻譯組裝成病毒顆粒,病毒顆粒出芽時會被細胞表面表達的外膜蛋白所包裝,即形成假病毒。假病毒具有以下優勢:

①具有單輪感染特性,生物安全性較高。

假病毒核酸分子上編碼囊膜蛋白的基因被修飾掉,因此不具備自我復制能力,只能進行單一周期的侵染,不能再組裝成病毒顆粒。

②在系統中可引入報告基因,便于檢測和分析。

可引入的報告基因主要有分泌型胎盤磷酸酯酶(SEAP)、β一半乳糖苷酶(Lac Z)、β一葡萄糖苷酸酶(GUS)、螢火蟲熒光素酶(LUC)和綠色熒光蛋白(GFP)等,便于進行定性和定量分析。

③制備過程相對簡單快速,降低了病毒變異,減少了檢測時間。

④宿主范圍廣泛、易被濃縮成高滴度、穩定性及轉染效率高。

在研究致病性高,并目不易體外培養的病毒時,制備假病毒是一種行之有效的、安全的、可信的方法。假病毒通常被用于病毒與宿主細胞間相互關系檢測、受體鑒定、中和抗體效價評價及基因治療等方面研究。綜上所述假病毒用來研究是非常方便快捷的,因此假病毒的保存是需要解決的問題之一。假病毒用于檢測試劑的冷凍干燥和貯藏過程中,很多因素如化學成分、凍結速率、凍結和脫水應力、玻璃化轉變溫度、干燥固體中剩余水分、貯藏環境的溫度和濕度等都會影響其中活性組分的穩定性甚至會導致失活。假病毒試劑,都需要添加合適的冷凍干燥保護劑和添加劑,也就是所謂的凍干賦形劑,配制成混合液后,才能進行有效的冷凍干燥和貯藏。因此,凍干的假病毒試劑檢測方法的開發、凍干保護劑的開發、
篩選及有效組合,還有凍干工藝曲線的方法開發及優化都是客觀存在且亟需解決的問題。假病毒全基因組質控品能從采樣步驟開始質控檢測全流程,并且是穩定的凍干珠形式。其他假病毒也都可以做成凍干粉、凍干珠的形式。假病毒凍干的方法和其他試劑樣本凍干的原理都是差不多的,也要篩選相應的保護劑、凍干曲線。各種靶基因的假病毒都可以開發成凍干形式進行保存或者配合試劑盒進行使用、運輸、貯存等。各種形式樣品凍干技術開發,凍干配方開發、凍干曲線開發,凍干樣品評價生產放大技術、各種微生物凍干、制劑凍干、藥品凍干等。

 

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